Šifra predmeta:
404B2		 Naziv predmeta:
Eksperimentalna biohemija

Školska godina:

2024/2025.

Uslovi pohađanja:

(001A2 + 029B2) / 401B2

ESPB:

10

Vrsta studija:

osnovne akademske studije

Studijski program:

Biohemija: 3. godina, zimski semestar, obavezni, stručno-aplikativni predmet

Nastavnici:

dr Zoran M. Vujčić
redovni profesor, Hemijski fakultet, Studentski trg 12-16, Beograd

dr Jelena Z. Radosavljević
docent, Hemijski fakultet, Studentski trg 12-16, Beograd

Saradnici:

Aleksa D. Savić, master biohemičar
istraživač-pripravnik, Inovacioni centar, Studentski trg 12-16, Beograd

Nenad M. Drulović, master biohemičar

Fond časova:

Nedeljno: tri časa predavanja + sedam časova laboratorijskih vežbi (3+0+7)

Ciljevi:

Da student nauči osnovne tehnike: pripremu ekstrakata proteina i nukleinskih kiselina, određivanje njihovih koncentracija. Osnovne i HPLC hromatografske tehnike i elektroforeze. Samostalna obrada literaturnih podataka.

Ishod:

Priprema studenata za samostalno rešavanje problema izolovanja proteina, nukleinskih kiselina i malih molekula; njihova strukturna određivanja i karakterizaciju. Osposobljavanje za prve korake u naučno-istraživačkom radu.

Oblici nastave:

Predavanja, eksperimentalne vežbe, tutorijal. Javna odbrana, uz korišćenje modernih pomagala (PPT format).

Vannastavne aktivnosti:

—

Literatura:

Osnovna literatura:

  1. R. Reed, D. Holmes, J. Weyers, A. Jones: Practical skills in biomolecular sciences, 2nd edition, Pearson, Prentice Hall, Harlow, 2003.
  2. Zoran Vujčić: Eksperimentalna Biohemija, Praktikum, Rantek, 2002.

Pomoćna literatura:

  1. Robert Scopes: Protein purification, 2000.
  2. D. M. Bollag, D. M. Rozycki, S. J. Edelstein: Protein methods, John Wiley and Sons, 2002.

Dodatni materijal:

—

  Nastavne obaveze i način ocenjivanja

Predavanja:

0 poena (3 časa nedeljno)

Program rada:

  1. Priprema i stabilizacija sirovog ekstrakata. Sterilizacija ceđenjem, haotropi i kosmotropi, puferi.
  2. Biosenzori, aptameri. Određivanje molekulskih masa proteina.
  3. Rasoljavanje i koncentrovanje proteina. Kvantifikacija proteina.
  4. Prečišćavanje proteina: taložne i hromatografske metode.
  5. Jonoizmenjivačka i afinitetna hromatografija proteina.
  6. Jonoizmenjivačka i afinitetna hromatografija proteina. 
  7. EBA, HIC, IMAC.
  8. FPLC hromatografija proteina.
  9. Elektroforeze i izoelektrično fokusiranje (IPG).
  10. Bojenja, zimogrami. Peptidne mape. Hemijske modifikacije proteina.
  11. Transfer i detekcija proteina na membranama. Afinitetna elektroforeza. 2D elektroforetske tehnike.
  12. Preparativne elektroforeze. Kapilarna elektroforeza.
  13. Proteomiks - osnovi. Sekvenciranje proteina. MALDI TOF. BLAST.
  14. Izolovanje, kvantifikacija i metode rekombinantne DNA. PCR. Ekspresija i prečišćavanje rekombinantnih proteina.
  15. Sekvenciranje NK.

Laboratorijske vežbe:

10 poena (7 časova nedeljno)

Program rada:

Vežbama se pristupa nakon položenog ulaznog kolokvijuma. Ukoliko student ne položi ulazni kolokvijum i ostvari minimalno 51% od ukupnog broja poena ima pravo da polaže još jednom ulazni kolokvijum.

Vežbe se rade u bloku od 10 radnih dana.

1-2. Pripremanje ekstrakta, određivanje koncentracije proteina.

3-4. Taložne metode.

5-6. Priprema matriksa, pakovanje kolona. Određivanje molekulske mase obojenog enzima (HRPO).

7-10. Jonoizmenjivačka, hidrofobna IMAC, FPLC: superedeks, hidrofobna, Mono Q.

10-12. Elektroforeze: nativna, izoelektrično fokusiranje, SDS PAGE, UT elektroforeza, 2D elektroforeza.

13-14. DNA. Izolovanje, kvantifikacija, analiza. Restrikciona digestija. Agarozna elektroforeza.

14-15. RNA. Izolovanje, kvantifikacija, analiza.

Pismeni ispit:

30 poena

Usmeni ispit:

40 poena

Tutorijal:

20 poena