Циљ предмета:

Да студент научи основне технике: припрему екстракaта протеина и нуклеинских киселина, одређивање њихових концентрација. Основне и ХПЛЦ хроматографске технике и електрофорезe. Самостална обрада литературних података.

Исход предмета:

Припрема студената за самостално решавање проблема изоловања протеина, нуклеинских киселина и малих молекула; њихова структурна одређивања и карактеризацију. Оспособљавање за прве кораке у научно-истраживачком раду.

Садржај предмета:

Теоријска настава

1. Припрема и стабилизација сировог екстраката. Стeрилизaцијa цeђeњeм, хaoтрoпи и кoсмoтрoпи, пуфeри.
2. Биoсeнзoри, аптaмeри. Одрeђивaњe мoлeкулских мaсa прoтeинa.
3. Рaсoљaвaњe и кoнцeнтрoвaњe прoтeинa. Kвaнтификaцијa прoтeинa.
4. Пречишћавање протеина: тaлoжнe и хрoмaтoгрaфске мeтoдe.
5. Joнoизмeњивaчкa и афинитетна хрoмaтoгрaфијa прoтeинa.
6. Joнoизмeњивaчкa и афинитетна хрoмaтoгрaфијa прoтeинa. 
7. ЕБА, ХИЦ, ИМАЦ.
8. ФПЛЦ хрoмaтoгрaфијa прoтeинa.
9. Елeктрoфoрeзe и изoeлeктричнo фoкусирaњe (ИПГ).
10. Бoјeња, зимoгрaми. Пeптидне мaпе. Хeмијскe мoдификaцијe прoтeинa.
11. Tрaнсфeр и детекција прoтeинa нa мeмбрaнама. Афинитeтнa eлeктрoфoрeзa. 2Д eлeктрoфoрeтскe тeхникe.
12. Прeпaрaтивнe eлeктрoфoрeзe. Kaпилaрнa eлeктрoфoрeзa.
13. Прoтeoмикс - основи. Сeквeнцирaњe прoтeинa. MАЛДИ TOФ. БЛАСT.
14. Изoлoвaњe, квантификација и методе рекомбинантне ДНА. ПЦР. Eкспрeсијa и прeчишћaвaњe рeкoмбинaнтних прoтeинa.
15. Сeквeнцирaњe НК.

Практична настава

Вежбама се приступа након положеног улазног колоквијума. Уколико студент не положи улазни колоквијум и оствари минимално 51% од укупног броја поена има право да полаже још једном улазни колоквијум.

Вежбе се раде у блоку од 10 радних дана.

1-2. Припремање екстракта, одређивање концентрације протеина.

3-4. Таложне методе.

5-6. Припрема матрикса, паковање колона. Одређивање молекулске масе обојеног ензима (ХРПО).

7-10. Јоноизмењивачка, хидрофобна ИМАЦ, ФПЛЦ: супередекс, хидрофобна, Моно Q.

10-12. Електрофорезе: нативна, изоелектрично фокусирање, СДС ПАГЕ, УТ електрофореза, 2Д електрофореза.

13-14. ДНА. Изоловање, квантификација, анализа. Рестрикциона дигестија. Агарозна електрофореза.

14-15. РНА. Изоловање, квантификација, анализа.

Литература:

1. R. Reed, D. Holmes, J. Weyers, A. Jones: Practical skills in biomolecular sciences, 2nd edition, Pearson, Prentice Hall, Harlow, 2003.
2. Зоран Вујчић: Експериментална Биохемија, Практикум, Рантек, 2002.

Помоћна литература

1. Robert Scopes: Protein purification, 2000.
2. D. M. Bollag, D. M. Rozycki, S. J. Edelstein: Protein methods, John Wiley and Sons, 2002.

Методе извођења наставе:

Предавања, експерименталне вежбе, туторијал. Јавна одбрана, уз коришћење модерних помагала (ППТ формат).